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食品水质微生物检验实训 化妆品化验员证报考入口-培养基灭菌后怎么测促生长能力？
培养基灭菌后的促生长能力测定是验证培养基质量的核心环节，目的是确认培养基是否具备支持特定微生物正常生长的能力。以下根据《中国药典》及GB 4789.28-2024等标准，系统介绍操作方法。
试验原理
将已知特性的标准菌株以低接种量（≤100 CFU）接种到待测培养基和对照培养基中，在规定的培养条件下培养，通过比较两者的微生物生长情况（菌落数量、形态特征、生长状态等），判断待测培养基的促生长性能是否合格。
试验准备
标准菌株选择
不同培养基对应不同的测试菌株，常用菌株包括：
测试菌株 | 保藏编号 | 类型 | 适用培养基 |
金黄色葡萄球菌 | CMCC(B)26003 / ATCC 6538 | 革兰氏阳性球菌 | TSA、甘露醇氯化钠琼脂等 |
铜绿假单胞菌 | CMCC(B)10104 / ATCC 9027 | 革兰氏阴性杆菌 | TSA、溴化十六烷基三甲铵琼脂等 |
枯草芽孢杆菌 | CMCC(B)63501 / ATCC 6633 | 革兰氏阳性芽孢杆菌 | TSA |
大肠埃希菌 | CMCC(B)44102 / ATCC 8739 | 革兰氏阴性杆菌 | 麦康凯琼脂、紫红胆盐葡萄糖琼脂等 |
白色念珠菌 | CMCC(F)98001 / ATCC 10231 | 酵母菌 | TSA、SDA、念珠菌显色培养基等 |
黑曲霉 | CMCC(F)98003 / ATCC 16404 | 霉菌 | TSA、SDA |
菌株管理要求：试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为0代），并采用适宜的保藏技术确保菌株生物学特性稳定。
菌液制备
将标准菌株接种至适宜的培养基上活化培养。
用0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液制备菌悬液。
逐级稀释至目标浓度，使接种量控制在**≤100 CFU/皿（管）**。
也可使用商品化定量菌种（如冻干质控菌种）替代传统菌液制备，操作更简便、定量更准确。
对照培养基
操作方法（按培养基类型分类）
固体培养基（计数用）
这是最常见的促生长试验类型，适用于TSA、PDA、SDA等计数培养基。
1. 接种：取适宜稀释度的菌悬液0.1 mL（接种量为50~250 CFU/皿），采用涂布法或倾注法接种至待测培养基和对照培养基平板上。
2. 平行设置：每种试验菌平行制备2个平板。
3. 培养：按标准规定的温度和时间培养。
4. 计数与比较：培养结束后计数菌落数，计算回收率。
液体培养基
适用于TGC（硫乙醇酸盐流体培养基）、TSB（胰酪大豆胨液体培养基）等。
1. 接种：将≤100 CFU的试验菌菌悬液接种至适量（日常使用最少量）待测培养基和对照培养基中。
2. 平行设置：每种试验菌平行制备2份（管）。
3. 培养：按规定条件培养。
4. 观察：比较待测培养基与对照培养基的浑浊度，判断生长情况。
选择性/鉴别培养基
适用于麦康凯琼脂、紫红胆盐葡萄糖琼脂、甘露醇氯化钠琼脂等。
1. 接种：取≤100 CFU的试验菌菌悬液≥0.1 mL，采用表面涂布法接种至待测培养基和对照培养基平板上。
2. 培养：按规定条件培养（培养时间不大于规定的最短培养时间）。
3. 观察：比较菌落大小、形态特征、指示剂反应是否与对照培养基一致。
常用培养基的培养条件与判定标准
培养基 | 测试菌株 | 接种方式 | 培养条件 | 判定标准 |
TSA（胰酪大豆胨琼脂） | 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉 | 涂布法/倾注法 | 30~35℃，≤72 h | 回收率0.5~2.0，菌落形态与对照一致 |
SDA（沙氏葡萄糖琼脂） | 白色念珠菌、黑曲霉 | 涂布法 | 20~25℃，≤5天 | 回收率0.5~2.0，菌落形态与对照一致 |
TGC（硫乙醇酸盐流体培养基） | 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌 | 直接接种 | 30~35℃，≤规定最短时间 | 与对照培养基比较，应生长良好（浑浊度一致） |
麦康凯琼脂 | 大肠埃希菌 | 涂布法 | 30~35℃，≤18 h | 菌落大小、形态、指示反应与对照一致 |
甘露醇氯化钠琼脂 | 金黄色葡萄球菌（促生长）；大肠埃希菌（抑制） | 涂布法 | 30~35℃ | 目标菌生长良好且指示反应正确；非目标菌不生长 |
结果判定标准
固体培养基（计数用）
回收率计算公式：
PR=待测培养基上的平均菌落数/对照培养基上的平均菌落数×100%
液体培养基
选择性/鉴别培养基
操作注意事项
接种量控制：菌液浓度必须严格控制在≤100 CFU/皿，接种量过大会导致菌落重叠影响计数，过小则统计误差增大。
涂布操作：菌液涂布后应待其被培养基吸收后再倒置培养，避免菌液被吸干后继续涂布造成机械损伤，导致回收率下降。
培养时间：促生长试验的培养时间不得大于产品检验的最短培养时间。
无菌对照：同时设置未接种的培养基作为阴性对照，确认无污染。
记录完整性：全程记录菌株编号、传代次数、接种量、培养条件、菌落数、菌落形态等信息，确保可追溯。
📌 总结：促生长能力测定的核心流程是"选菌株→制备菌液→接种→培养→比较判定"。关键在于：接种量控制在≤100 CFU，设置对照培养基平行比较，固体培养基以回收率（50%~200%）和菌落形态为判定依据，液体培养基以浑浊度为判定依据。每批培养基在使用前都必须通过促生长试验，这是保证微生物检测结果可靠性的基本前提。
