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培养基的灵敏度测试方法介绍
来源:圣问技术职业技能培训中心 | 作者:stspx134 | 发布时间: 2020-11-13 | 487 次浏览 | 分享到:
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培养基的灵敏度测试方法介绍

1.用于菌落计数的半固体琼脂培养基促菌生长(灵敏度)检查的方法:对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查(促菌生长检查)。取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个,用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌,同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个(如较著名的如MERCKDIFICOL产品)做对照试验,待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后,将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时,(也可采用浇碟法进行)取出培养后的平皿点计菌落数。样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。否则,需重新检查,或该培养基被视为不符合促生长要求。

2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长(灵敏度)检查的方法:对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培养基,将接过种的培养基置于指定条件下培养。应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长,则证明此培养基合格。

原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基,一旦制成成品培养基,则应对每个配制批号培养基进行促菌生长(灵敏度检查)试验,以考察培养基的质量。按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。

如果实验室使用的是商购的成品培养基,供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告,报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长(灵敏度)试验结果等项目。建议在使用某一新的成品培养基(新供应商或新培养基品种)时,应至少考察三个不同批次的培养基质量,只有三批质量均合格方可使用该培养基。微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后,可审查供应商的质检报告,而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查,但半年应至少检查一次,以复核其质量。用于无菌检查试验的每批培养基,均必须按规定进行灵敏度检查试验,此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。

建议在正式使用前即应完成对培养基的质量检查。如果在进行灵敏度试验的同时,也使用该培养基进行样品检查,那么,一旦培养基的无菌性或灵敏度不符合规定,则检验结果应无效。无论这些质量控制检查试验何时完成,实验室都必须在相关产品放行之前或检验报告发出之前,对所用培养基的无菌性及灵敏度试验资料的完整性和合格予以确认。

灵敏度(促生长)检查试验用菌悬液,可用标准菌种制得,也可向具备适当资质的供应商购买。目前市场上的商用产品,如REMEL公司的培养基质量Quanti-cultR检查用菌种,小瓶内每片薄膜上含有10~100CFU。此类产品使用简单,但操作者需严格遵守供应商的使用要求。另外,尽管所购试菌种均附有质量证书,正式使用前,仍必须用倾注平皿法或铺表面法等标准检测方法对菌悬液的微生物数量进行复核确认。

培养基类别
用途
推荐用微生物
建议培养条件
 
大豆胰蛋白胨琼脂
(soybean-casein digest agar)
(含或不含钝化剂)
限度检查
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌
30~35℃
2~3天
萨布罗葡萄糖琼脂
(Sabouraud dextrose agar)
玫瑰红钠琼脂培养基
马铃薯葡萄糖琼脂
(Potato dextrose agar)
(内含或不含钝化剂)
限度检查
白色念珠菌、黑曲霉菌
20~25℃
5~7天
麦康凯琼脂(MacConKey agar)
列文-伊红亚甲基琼脂
(LevineEosin-methylene blue agar)
 
限度检查
大肠埃希菌
30~35℃
1~2天
贝尔德-帕克琼脂(Baird-Parker agar)
甘露糖醇-氯化钠琼脂
(mannitol-salt agar)
伏尔-约翰逊琼脂
(Vogel-Johnson agar)
限度检查
金黄色葡萄球菌
30~35℃
1~2天
溴化十六烷基三甲铵琼脂
(cetrimide agar)
假单胞菌属琼脂Pseudomonas agar(s)
绿脓杆菌素琼脂(Pseudosel agar)
 
限度检查
铜绿假单胞菌
30~35℃
1~2天
连四硫酸盐肉汤(fluid tetrathionate)
亚硒酸盐-胱氨酸肉汤
(fluid selenite-cystine)
 
限度检查
沙门菌属
30~35℃
12~24h
亮绿琼脂(brillian green agar)
XLD琼脂(XLD agar)
亚硫酸铋琼脂(bismuth sulfite agar)
三糖铁琼脂(triple sugar Iron agar)
 
限度检查
沙门菌
30~35℃
1~2天
胰酪胨大豆肉汤
(Casein Digest-Soy broth)
(内含或不含钝化剂)
 
限度检查
金黄色葡萄球菌、
铜绿假单胞菌
30~35℃
1~2天
乳糖增菌液(lactose broth)
 
限度检查
大肠埃希菌、沙门菌
30~35℃
1~2天
培养基类别
用途
推荐用微生物
建议培养条件
 
大豆胰蛋白胨琼脂
(soybean-casein digest agar)
(内含或不含钝化剂)
抑菌效果检查
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌
30~35℃
2~3天
萨布罗葡萄糖琼脂
(Sabouraud dextrose agar)
马铃薯葡萄糖琼脂
(Potato dextrose agar)
抑菌效果检查
白色念珠菌、黑曲霉
20~25℃
5~7天
硫乙醇酸盐肉汤(fluid thioglycollate)
 
 
无菌检查
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭状芽孢杆菌
30~35℃
5天
大豆胰蛋白胨肉汤
(soybean casein digest broth)
无菌检查
枯草杆菌、白色念珠菌、黑曲霉
20~25℃
5天
R2A培养基(R2A medium)
平板计数琼脂(plate count agar)
大豆胰蛋白胨琼脂(trypticase soy agar)
胰蛋白胨葡萄糖酵母
(tryptone Glucose yeast agar)
 
水质分析
洋葱假单胞菌、大肠埃希菌
30~35℃
2~3天
和/或20~25℃
3~5天
营养琼脂(nutrient agar)
接触碟(contact Plates)
 
 
含菌量检测
环境监测
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉
30~35℃培养2天,再置20~25℃培养5天
 
乳糖肉汤(fluid lactose medium)
亮绿胆盐肉汤
(builliant green bile broth)
 
大肠菌群检测
大肠埃希菌
30~35℃
1~2天
空气浮游需氧细菌检测培养基
(air strips/media for aerobic bacteria)
空气监测
金黄色葡萄球菌、枯草杆菌
30~35℃
1~2天
空气浮游需氧细菌检测培养基
(air strips/media for fungi )
空气监测
白色念珠菌、黑曲霉
20~25℃
5~7天
厌氧琼脂(anaerobic agar)
梭状芽孢杆菌琼脂(clostridia agars)
哥伦比亚琼脂(Columbia agar)
 
厌氧菌检测
梭状芽孢杆菌
35~37℃
2天
大豆胰蛋白胨琼脂
(soybean casein digest agar)
生物指示剂
(蒸汽灭菌)
嗜热脂肪芽孢杆菌
55~60℃
2天
大豆胰蛋白胨琼脂
(soybean casein digest agar)
生物指示剂
环氧乙烷灭菌
枯草芽孢杆菌
30~35℃
2天
血琼脂(blood agar)
 
分离溶血反应
金黄色葡萄球菌
35~37℃
1~2天


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