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想当化妆品检验员？从“小白”到“技术大拿”实操无菌微生物检验员资格证培训-实验仪器使用防护指南

总述

在生物实验室中,我们所使用的各种仪器设备对于确保实验的安全性和准确性至关重要。为了保障工作人员的身体健康和实验成果的有效性，必须严格遵守特定的操作规程，并采取必要的防护措施。

本规范旨在指导生物实验室内的仪器设备操作与防护工作,确保所有人员能够安全、高效地进行各项实验活动。无论是初次接触新设备的员工还是经验丰富的操作者，都应遵循此规定，以达到最佳的工作效果和安全保障。

玻璃仪器

正确的使用各种玻璃仪器对于减少人员伤害事故及保证实验室的安全是非常重要的。实验室中不允许使用破损的玻璃仪器。对于不能修复的玻璃仪器，应当按照废物处理。在修复玻璃仪器前应清除其中所残留的化学药品。实验室人员在使用各种玻璃器皿时，应注意以下事项：

（1）在橡皮塞或橡皮管上安装玻璃管时，应戴防护手套。先将玻璃管的两端用火烧光滑，并用水或油脂涂在接口处作润滑剂。对粘结在一起的玻璃仪器，不要试图用力拉，以免伤手。

（2）破碎玻璃应放入利器盒（供应室可领利器盒）处理。较大的破碎玻璃应放入专门的加厚箱子，并封装好，贴明警示标识，等待学院处理。破碎玻璃在放入垃圾桶前，应用水冲洗干净。

（3）不要将加热的器皿放在过冷的台面上，以防止温度急剧变化而引起玻璃仪器破碎。

生物安全柜

1、应参考国家标准和相关文献，对所有可能的使用者都介绍生物安全柜的使用方法和局限性。应当发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是，当出现溢出﹑破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。

2、生物安全柜运行正常时才能使用。

3、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。

4、安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。

5、安全柜内不能使用本生灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。

6、所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。

7、尽量减少操作者身后的人员活动。

8、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。

9、不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。

10、工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。

11、在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5min。

12、在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。

13、通过在生物安全柜内人工产生微生物（枯草杆菌芽孢） ，在生物安全柜外用培养皿采集枯草杆菌芽孢判定生物安全柜对工作人员的防护能力。

超净台

1、使用前15-20分钟用75%酒精擦拭工作台面，将实验所需的物品放于台面中间工作区的两侧，使用的移液器吸头、试管、培养皿等均事先灭菌。

2、使用前15-20分钟开紫外灯，对工作区域进行照射杀菌，将细菌、病毒全部杀死。为避免物品过多而导致紫外灭菌不彻底，台面平时只需放移液器、75%酒精喷壶、75%酒精棉、接种器、酒精灯、记号笔和打火机等。

3、使用前10分钟将通风机启动，以排除臭氧等有害气体。

4、操作时将照明灯开关打开，关掉杀菌灯。

5、操作前用75%酒精棉擦洗双手和前臂。任何进入超净台的物品都必须经过75%酒精擦拭后才可进入超净台。

6、工作台面不要存放不必要的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。打开各种瓶盖前先过火，以固定灰尘，打开的瓶口、试管口过火，镊子、接种器使用前应经火灼烧以再除菌。

7、不要在工作台面上记录，工作时应尽量避免明显扰乱气流的动作。

8、工作完毕后，也必须以75%酒精擦拭台面，并且将使用过的器具材料归定位,垃圾清理干净,停止风机运行，关掉照明灯，将上述不属于超净台面的个人物品拿走。

9、操作员需严格按照上述规程实验，使用移液器时用酒精棉擦拭移液器头。吸头等用前需用报纸包好并灭菌，且仅限个人使用。

10、为配合发酵工作，避免染菌，超净台周围需定期进行打扫并消毒。用福尔马林（40%甲醛）加少量高锰酸钾定期对房间进行密闭熏蒸。

   注：超净台进风口的背面或正面的下方，金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布，用以阻挡大颗粒尘埃，应常检查、拆洗，如发现泡沫塑料老化，要及时更换。工作台面正面的金属网罩内是超级滤清器，超级滤清器也可更换，如因使用年久，尘粒堵塞，风速减小，不能保证无菌操作时，则可换上新的。

培养箱

培养箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞的培养繁殖。其原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境，如控制一定的温度、湿度、气体等。培养箱使用过程整体要注意以下几点：

1、培养箱应放置在清洁整齐、干燥通风的工作间内，箱内的培养物不宜放置过挤，之间应保持适当间隔，以利冷（热）空气的对流循环。无论放入或取出物品应随手关门，以免温度波动。

2、带有制冷压缩机的要遵守冰箱保养的注意事项，如保持电压稳定、不要过度倾斜、不要短时间内反复开关仪器、及时清扫散热器上的灰尘等。

3、隔水式培养箱应注意先加水再通电，同时应经常检查水位，及时添加水。

4、开关细胞培养箱要小心，培养箱打开后要尽快关上，先要扭紧玻璃门，再关上培养箱门。培养箱铁架子和盛水托盘要定时高压灭菌处理。随时留意最底层的盛水托盘,必要时补充高压灭菌水。随时留意细胞培养箱二氧化碳浓度,必要时立即更换二氧化碳钢瓶。

摇床

1、电源必须有可靠的保护接地线，禁止非专业人员拆卸电器控制部分。

2、仪器长时间低温运行时，要注意除霜或按期做加热驱潮处理。

3、摇床高速旋转工作时，为避免仪器产生大的振动，所占的培养试剂瓶应在摇台上对称放置，各瓶的培养液应大致相等。

4、仪器长期不用时，特别是在雨季或潮湿季节，应定期通电运行5-8h以驱除设备电气元件吸附的水分。

5、带有制冷压缩机的要遵守冰箱保养的注意事项，如保持电压稳定、不要过度倾斜、不要短时间内反复开关仪器、及时清扫散热器上的灰尘等。

6、务必将东西放牢，并在启动前确认别人的东西已经放牢。

7、一定要在摇床开启直至生至最大转速后，摇床运行平稳后才能离开。

8、若不慎将液体洒出，一定要将其擦干净，防止滋生杂菌。

9、若有东西掉入机芯或卡在摇板底下无法清理，请关闭摇床转移所有培养物，并第一时间告知负责人。严禁带故障运行。

移液器

移液器操作规范和使用注意事项：

1、设定移液体积

　　从大量程调节至小量程为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可；从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。

2、装配移液枪头

　　将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的，长期这样操作回导致移液器的零件因撞击而松散，严重会导致调节刻度的旋钮卡住搜索。

3、吸液及放液

　　垂直吸液，吸头尖端浸入液面3mm以下，吸液前枪头先在液体中预润洗；慢吸慢放，放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。

4、吸有液体的移液枪不应平放，枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。

5、移液枪在每次实验后应将刻度调至最大，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命。

6、吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。

7、为获得较高的精度，吸头需预先吸取一次样品溶液，然后再正式移液，因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸头内壁会残留一层”液膜”，造成排液量偏小而产生误差。

8、浓度和粘度大的液体，会产生误差，为消除其误差的补偿量，可由试验确定，补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。

9、可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法，来校正取液器，1mL 蒸馏水20℃时重0.9982g。

10、在设置量程时，请注意旋转到所需量程，数字清清楚楚在显示窗中，所设量程在移液器量程范围内不要将按钮旋出量程，否则会卡住机械装置，损坏了移液器。

11、移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等）。

12、不要用大量程的移液器移取小体积的液体，以免影响准确度。同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体，请使用移液管进行操作。

移液器的校准方法：

1、准备超纯水、万分之一天平（如果校正0.5~2.5ul量程的，至少要十万分之一的天平）、温湿度计、恒温室，还需准备一个小口容器，防止水分挥发。

2、按移液器总量程的100%、50%、10%分别进行第三和第四步。

3、吸头要反复吸取超纯水三次后，吸取固定容积的超纯水，推入放置在天平上的小口容器中，待数据稳定读取天平数值，同时记录温度。重复10次。

4、将测量的数据用iso8655中的计算公式计算获得对应温度下的体积，取平均值。

5、根据三个测量点的偏差，用移液器专用的校正扳手（不同品牌的移液器的校正窗和扳手的形式是不同）通过移液器的校正窗进行调整。

6、重复3、4步，直至偏差在ISO8655的要求内为止。

　　如果是电动移液器，那校正就简单多了，一般测量完三个校正点的数据后，直接进入校正界面，将误差数据输入就可以自动校正了。

　　一般还是交给厂家或者代理商进行校正比较放心，一般地区总代都是购买了自动校正平台的，将移液器放在上面，机器自动进行测量和校正工作的。

荧光生物显微镜

显微镜的操作方法及注意事项

1、使用分析测试中心显微镜，必须预约和登记。开机先开显微镜电源，需要用荧光时再开荧光；开机后，放上待观察样品，首先明场观察(bright field)时，请选择合适的物镜，物镜倍数从小到大观察。将样品置于载物台上，调节高度和亮度。转动载物台时，请轻轻转动。用完需将亮度调到最低再离开。

2、观察荧光时，首先打开荧光光源，等待几分钟后再观察。选择合适的激发光，观察完必须将荧光关闭再离开。

3、拍摄图像时，在相连接的电脑上打开相应软件，将显微镜的相应旋钮打到view上，调节曝光时间等参数。用完需要将光源和照相机关闭。

4、用完后，请核对是否关闭荧光光源和显微镜电源，聚光镜是否盖上盖子，载物台是否放置低位，物镜是否调至无物镜对准载物台，然后罩上目镜，盖上红布袋防灰尘。

5、请在记录本上如实登记。

6、仪器的光源是有寿命的，请本着节约原则，完成实验时请及时关灯。若两次使用间隔时间短可以不必关灯，若间隔时间长请及时关灯。因为经常开关仪器也会影响光源寿命。

7、物镜不可用手或者其他物体触摸。所以观察样品尽量盖盖玻片，如果没盖盖玻片的请务必注意样品不得沾到并污染物镜，若不小心污染了物镜，请及时用擦镜纸按“水→70%乙醇→100%乙醇”步骤从中心向外螺旋转圈清理对应物镜。

成像系统

凝胶成像分析系统可以应用在蛋白电泳凝胶，DNA凝胶，样品进行图像采集并进行定性和定量分析。

使用注意事项：

1、注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入软件。

2、紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，凝胶成像系统的门不能用污染的手套接触，进行软件操作时同样不能被污染的手套接触。

3、在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。

4、照相后将废胶取出，并用较软的纸擦拭干净。

5、调焦时要轻，动作不要剧烈。

6、保持观测室内环境干燥，及时将遗留在观测板上的水或其他液体檫干。

7、使用仪器时，要将门及观测台关紧，否则将无法正常使用紫外灯。

8、尽可能不要将电脑连接到因特网或局域网上，同时在电脑上安装杀毒软件，做到专机专用。

9、较长时间不用仪器时，请将仪器用防尘罩盖上。

10、为延长灯管的使用寿命，请观测好凝胶后及时关闭光源。

pH计

pH计使用注意事项：

1、仪器标定校正的次数取决于试样、电极性能及对测量的精确度要求，一般经一次标定后可连续使用一周或更长时间，pH计校准时使用对应校准液，按照仪器说明书校准，在下列情况时，仪器必须重新标定：

（a）长期未用的电极和新换的电极。

（b）测量浓酸（pH<2）以后，或测量浓碱（ph>12）以后。

（c）测量含有氟化物的溶液和较浓的有机溶液以后。

（d）被测溶液温度与标定时的温度相差过大时。

2、pH电极前端的保护瓶内有适量电极浸泡溶液，电极头浸泡其中，以保持玻璃球泡和液接界的活化。测量时旋松瓶盖，拔出电极，用纯水洗净即可使用。使用后再将电极插进并旋紧瓶盖，以防止溶液渗出，如发现保护瓶中的浸泡液有混浊，发霉现象，应及时洗净，并调换新的浸泡液。

3、电极浸泡液的配制：电极浸泡液即为3MKCl。电极应避免长期浸泡在纯水、蛋白质溶液和酸性氟化物溶液中，并防止和有机硅油脂接触。

4、经常保持仪器的清洁和干燥，特别要注意保持电计、电极插口的高度清洁和干燥，否则将导致测量失准或失效，如有沾污可用医用棉花和无水酒精揩净并吹干。

5、复合电极前端的敏感玻璃球泡，不能与硬物接触，任何破损和擦毛都会使电极失效。测量前和测量后都应用纯水清洗电极，清洗后将电极甩干，不要用纸巾擦试球泡，这样会使电极电位不稳定，延长响应时间。在粘稠性试样中测定后，电极需用纯水反复冲洗多次，以除去粘在玻璃膜上的试样，或先用适宜的溶剂清洗，再用纯水洗去溶剂。

6、电极经长期使用，或被测溶液中含有易污染敏感玻璃球泡或堵塞液接界的物质，而使电极钝化，其现象是敏感梯度降低，响应慢，读数不准，可根据不同情况采取下列措施：

（a）玻璃球泡污染老化：将电极用0.1mol/L稀盐酸浸泡24小时，用纯水洗净，然后再用电极浸泡液浸泡24小时，如果钝化比较严重，也可将电极下端浸泡在4% HF（氢氟酸）中3~5秒种，用纯水洗净，然后在电极浸泡液中浸泡24小时，使之复新。

（b）玻璃球泡和液接界污染的清洗：（供参考）

污染物             清洗剂

无机金属氧化物     低于1mol/L稀酸

有机油脂类物       稀洗涤剂（弱碱性）

树脂高分子物质     稀酒精、乙醚

蛋白质血球沉淀物   酸性酶溶液（如食母生片）

颜料类物质         稀漂白液、过氧化物

电极外壳的材料是聚碳酸酯，选用清洗剂时请注意，如四氯化碳、三氯乙稀、四氢呋喃等请慎用，因为这些试剂会溶解聚碳酸酯材料，从而使电极失效。

7、仪器一般配有三瓶pH校正溶液（pH4.00、pH6.86和pH9.18各一瓶），这三瓶不同颜色的校正缓冲溶液内含防霉消毒剂，因此可以在环境温度下长期存放而不变质。

8、pH电极电极斜率低于85% 时（视测试精度和范围而定，且校正缓冲溶液要准确），则应考虑对电极进行活化处理或更换电极。

纯水系统

1、为了进一步降低用水成本、节约能源，请根据需求分级取用纯水。

2、节假日或长时间无人看护时，请关闭设备水源、电源，以防意外发生。

3、超纯水设备需要定期清洗或更换内部滤芯。因为不管使用哪一种材料的滤芯，经过一段时间的工作都会吸附上很多杂质，很容易成为细菌滋生的温床。在超纯水机滤芯使用周期上，应该严格执行定期更换的标准，规范滤芯的后期保养服务。滤芯定期更换，清洗、维护，确保超纯水机水质的合格性。

4、有故障及时解决。纯水设备在运行过程中，如果出现故障，应当及时检修维护，以免小问题变成大麻烦。

电泳仪

1、电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。

2、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。

3、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。

4、在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围)，可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则容易影响仪器寿命。

5、某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，容易造成不必要的人为机器损坏。

6、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。

荧光定量PCR仪

1、使用仪器过程中请轻开轻闭。Q-PCR仪里的光源是有寿命的，请本着节约原则，完成实验时请及时关灯。若两批反应间隔时间短可以不必关灯，若两批反应间隔时间长请及时关灯。因为经常开关仪器也会影响光源寿命。

2、大家做Q-PCR时变性温度和测melting temperature的温度都设置为95度，不要过高。过高的温度没有必要，还会增加加热模块的损耗。

3、平时查看Q-RT结果时，不需要打开仪器开关。

4、用完不仅要关闭软件的开关，也请务必关闭仪器电源。

5、完成实验请随手拿走自己的板，并请在记录本上如实登记。

6、每三个月定时用润滑膏润滑96孔板旁的滑杆。

普通热循环仪（PCR仪）

1、 为保护PCR仪，冷却温度建议设置为12度；

2、 PCR仪尽量避免过夜运行；

3、 若PCR程序运行完后，再无他人预约使用，请及时关闭PCR仪电源；

4、 请善待他人PCR产物，请将他人PCR产物及时放入指定4度冰箱位置内。

超声波破碎仪

超声波破碎仪通过水介质的空化作用，使细胞等结构并不是十分紧密的物料发生破碎、分离。效果好，效率高。超声波破碎仪是一种利用超声波在液体中产生空化效应的多功能、多用途仪器。

超声波细胞破碎仪使用方法：把你要破碎的材料放到烧杯中，将超声波细胞破碎仪的探头放到材料中，开电源设定时间，一个是震动的时间，一个是间歇的时间。

使用注意事项：

1、在破碎的过程中会大量的产热，一般的都是冰浴下破碎；

2、切记空载，一定要将超声变幅杆插入样品后才能开机；

3、变幅杆（超声探头）入水深度：15 mm 左右，液面高度最好有30mm以上，探头要居中，探头不能碰到容器壁和底。超声波是垂直纵波，插入太深不容易形成对流，影响破碎效率；

4、超声参数设置：具体设置见说明书

1）时间：超声时间每次最好不要超过5秒 ，间隙时间应大于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命；

2）超声功率：不宜太大，以免样品飞溅或起泡沫。如小于10ml样品容量，功率应在200w以内；10-200ml样品容量的功率在200－400w；200ml以上的样品容量功率在300-600w之间；

3）容器选择：有多少的样品就选多大的烧杯，这样也是有利样品在超声中对流，提高破碎效率。例如；20ML的处理量最好用20ML的烧杯；

5、若样品放在1.5ml的EP管里请一定要将EP管固定好，以防冰浴融化后液面下降导致空载；

6、日常保养：用完后用酒精擦洗探头或用清水进行超声；

7、使用超声波细胞破碎仪微探头时，振幅调节不得超过70%，否则会造成探头损坏。

高压灭菌器（特种设备）

一、 仪器操作使用：

1、开机前检查（以品牌：HIRAYAMA/型号：HV-85为例）

1.1  灭菌锅使用前要先检查锅内水位，以刚好淹没过中心标杆为佳，不可太低，也不可超出到圆桶底层。其次需检查外部水箱内的水位，确保其在“高”“低”线之间。加水请加RO反渗透水。

1.2  同时记得检查右下角放水阀有没有处于关闭状态。

2、开机灭菌

2.1  开机灭菌前先装入待灭菌物品（注意：不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果；有纸和棉塞等物品不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿；灭菌锅分上下两层，上层蒸汽相对比较充足，下层水较多，故上层多放置对无菌条件需求比较高的试剂及器皿）

2.2  打开电源开关，将盖子盖好（小心伤手），先将压力阀由UNLOCK状态拨到LOCK状态，系统会处于STAND BY状态，并显示灭菌程序设定的温度和时间，常规灭菌湿热120℃ 20min，如无特殊需求无需改动。

2.3  按开始键后会进入HEAT阶段，请使用者确认系统确实开始进入加热阶段并运行正常后才能离开，如有异常请及时询问王老师或懂的他人。

3、结束

3.1  待进入WARM阶段且要等锅内压力降到0 MPa后才可打开灭菌锅。进行下一轮灭菌前要待灭菌锅内温度降至50℃以下。

3.2  用完请在记录本上如实登记。

二、使用注意事项：

1、只有经过专业训练的持有特种设备作业人员证的人才能操作灭菌锅。平时尽量都用学院的公共消毒室，实验室的灭菌锅只在急需或特殊情况下才使用。

2、请值日生及时取出已灭菌物品，注意不要将未灭菌的器皿及培养液放在已灭菌区，以免发生污染。

3、含有液体的瓶子在灭菌时要方正，以防倾倒， 新配的培养液需及时灭菌，不可直接室温放置过夜。

4、灭菌锅内的水每隔一段时间需定期更换，看到锅内水颜色发生明显变化请及时换水。

5、灭菌锅是高温高压仪器，操作不当易发生危险。因此禁止过夜灭菌，减少安全隐患。

三、配备灭菌器需备齐以下资料和记录：

1、压力容器的出厂资料：内容包括设计文件、竣工图样、产品合格证、产品质量合格证名、安装资料等）；

2、 《使用登记证》和《压力容器作业人员证》：两证缺一不可，各实验室或平台需指定专人自费培训、考试，持有《压力容器作业人员证》的人员才可上岗操作灭菌器。

3、 《特种设备使用登记表》：内容需包含压力、温度、开关机时间（维持时间）等必需信息；

4、 压力容器年度检查、定期检验报告：厦门市质量技术监督局每年会上门对灭菌器进行年度检测或全面检测，并收取相应检测费用。

5、安全附件及仪表的校验、修理、更换记录：主要为安全阀、压力表，安全阀校验周期为1年，压力表校验周期为6个月，校验时间达15-20天，均要自行送到指定地点校验，并收取相应校验费用。

6、压力容器的安全管理制度；

7、压力容器应急专项预案和演练记录；

8、压力容器事故、故障情况记录；

9、其他与保障性检验相关的技术资料。

四、  高压灭菌器的设计使用年限：

设计使用年限一般为7-10年（以厂家说明书为准），达到设计使用年限需要继续使用的，应当按照安全技术规范的要求通过检验或者安全评估，并办理使用登记证书变更，然后填写《特种设备安全使用申请书》，由实验室负责人签字后，方可继续使用。允许继续使用的，需要每年做一次全面检测和年度检测，并缴纳相应的检测费用。若检验合格后继续使用过程中发生安全事故，实验室负责人需承担全部责任。